Oroboros O2k 是目前国际认可度很高的一款多样本能量代谢测量/分析产品

 

 

O2k 系统通过高分辨率的极谱氧电极和全功能的荧光技术实现对样本的线粒体呼吸功能以及生物体的能量代谢进行精准定量及分析。

 

 

多功能参数检测：可同时检测耗氧率、呼吸速率、呼吸控制比率、PH 值、线粒体膜电位、自由基、ROS、ATP、Ca2+、NO、H2S、TPP+。

多种样品适用：可用于直接测量线粒体、原代细胞、传代细胞、组织器官，或者微生物、植物细胞等。

 

 

 

 

性能特点：

❖ 双通道系统/多通道系统

❖ 测量样本容量 0.5ml-3.5ml

❖ 温度范围： 4-47 ℃ ， 温 度 稳 定 性 为0.002℃，可进行低温试验

❖ 具有可变速的磁力搅拌功能

❖ 极谱氧电极传感器，检测氧流量分辨率为 1 pmol O2∙s^-1∙ml^-1，稳定状态下5分钟内变化不超过 0.5 pmol ∙ s^-1∙ml^-1 

❖ 荧光检测单元：双通道/四通道

❖ 荧光检测参数包括：线粒体膜电位 Δψ、ATP、Ca²⁺、ROS

❖ 独立外接电极单元：PH、H₂O₂、TPP⁺、H₂S 、NO 

❖ 样品腔为杜兰玻璃、钛金属等极低活性的材质，降低背景氧干扰

❖ 同步显示流动氧的浓度；自动进行氧信号的校正。

❖ 双通道微量注射泵，具有注射和回抽的功能，自动化控制，可在软件的编程下进行定时、定量的精准加样，不限制加样次数。

❖ 附有手动加药系统，配有 15 种不同量程的微型加药针

❖ 专用组织匀浆工具，采用匀浆管技术对样本进行研磨，样本需求量少至几毫克。

❖ 可自由设计实验，根据实验设计实时的加入不同的底物、抑制剂等化合物去改变线粒体的呼吸，最多可以加入 20 多种

❖ 强大的 DatLab 软件功能：可实时显示并记录所有测量参数；可在实验过程中随时更改实验设计；可自动进行氧气等参数的校准；具有 Protocol 编程功能，支持客户自定Protocol 程序，方便客户选用。

 

 

Oroboros O2K 技术优势

高精度电极检测方法实验使用试剂开放，无实验耗材消耗封闭性检测环境，可进行低氧/常氧/高氧实验拥有加热/制冷模块，可实现电子控温，温度精度高精准定量检测方式，直接检测样本消耗 O2 的含量具有搅拌系统的检测腔，确保腔室内样本溶液均匀，可提高检测样本的准确性和实验重复性.

 

应用演示：

实验目的为探究不同浓度解耦联剂FCCP 对细胞最大氧耗率 OCR 的影响。细胞经氧化磷酸化抑制剂寡酶素处理后，细胞的耗氧率显著降低，使细胞呼吸达到 Leak 水平。实验第 30 分 钟开始加入 0.5uM FCCP，并每间隔120 秒逐量增加 0.5uM。

 

 

实验数据结果显示，随着 FCCP 浓度的不断增加，细胞耗氧量呈现显著增加，并且在 FCCP 浓度加入剂量为 5.5uM 时达到最大值，而再增加浓度并不会使细胞耗氧率出现显著增加，这表明 FCCP 的最佳浓度为 5.5uM。

 

应用演示：

实验目的为了解细胞的能量代谢机制。实验样本为不同量的人类股外侧肌组织，将样本A3.4mgW_w组织与样本B2.8mgW_w组织分别置于双通道的细胞代谢测量分析系统中，并分别加入苹果酸、辛酰肉碱、ADP、谷氨酸、琥珀酸、鱼藤酮、丙二酸、粘噻唑、以及抗霉素等，观察细胞的耗氧情况。红色曲线为样本 A，绿色曲线为样本 B，实验数据显示不同量样本加入相同剂量的药物后耗氧率基本相同。

 

 

 

应用演示：

测量细胞为小鼠骨髓癌细胞。实验中使用TIP 2k 微型滴定泵加入解耦联剂 FCCP，实验设定滴定间隔 120 秒，循环滴定 15 次，每次逐量增加 0.5uM，加药浓度从0.5uM-7.5uM。耗氧率随解耦联剂 FCCP的不同浓度的变化而不同；O₂含量逐步下降。

 

 

 

应用演示：

实验为测量大鼠脑部线粒体的耗氧率与 H₂O₂之间的相互作用。实验中分别添加丙酮酸、谷氨酸、ADP、琥铂酸、鱼藤酮、寡霉素、FCCP、抗霉素等，实验结果显示线粒体在底物型试剂添加过程中其耗氧率随底物的添加产生变化，而活性氧的变化不明显。当抑制剂添加之后，明显可见活性氧产生积累，进而影响好氧率的变化情况。

 

 

 

参考文献：

❖ Bajzikova M, Kovarova J, Coelho AR, Boukalova S, et al. Reactivation of dihydroorotate dehydrogenase-driven pyrimidine biosynthesis restores tumor growth of respiration-deficient cancer cells. Cell Metab 29:399-416.

❖ Rodríguez-Nuevo A, Díaz-Ramos A, Noguera E, et al. Mitochondrial DNA and TLR9 drive muscle inflammation upon Opa1 deficiency. EMBO J 37.

❖ Bhaskaran S, Pharaoh G, Ranjit R,et al. Loss of mitochondrial protease ClpP protects mice from diet-induced obesity and insulin resistance. EMBO Rep 19. pii: e45009.

❖ Mills EL, Ryan DG, Prag HA, Dikovskaya D, et al. Itaconate is an anti-inflammatory metabolite that activates Nrf2 via alkylation of KEAP1. Nature 556:113-7.

❖ Calcutt NA, Smith DR, Frizzi K, Sabbir MG, et al. Selective antagonism of muscarinic receptors is neuroprotective in peripheral neuropathy. J Clin Invest 127:608-22.